- Разное

Регистрация в ифнс ип: Я хочу подать заявление на регистрацию ИП | ФНС России

Содержание

Новый порядок электронного взаимодействия при регистрации ИП и организаций: что изменилось

Для формирования и электронной подачи документов ФНС рекомендует воспользоваться:

  1. Специальным программным обеспечением «Подготовка документов для государственной регистрации». Установочный файл и инструкции выложены на сайте ФНС. Программа используется только для подготовки (заполнения и проверки) заявления Р11001 или Р21001. Для направления документов в ИФНС она не подойдёт.
  2. Специальным сервисом. Он становится доступен после авторизации с помощью квалифицированного сертификата электронной подписи (УКЭП). Сервис позволяет подготовить заявление, загрузить документы (скан-копии), необходимые для регистрации юрлица или ИП, и направить весь комплект в ИФНС для принятия решения о регистрации.
  3. Мобильным приложением «Личный кабинет ИП». На странице входа в приложение есть пункт «Зарегистрировать ИП». Способ подходит только для предпринимателей, позволяет сформировать и направить заявление, но прийти в ИФНС всё равно придётся — для идентификации и завершения регистрации.

Самый удобный и быстрый способ, при этом обеспечивающий полностью удалённую регистрацию компании или ИП, — второй вариант.

Заявление для регистрации организации или ИП формируется в виде файла формата ods (ГОСТ Р ИСО/МЭК 26300-2010), xls (xlsx), tif, или pdf. Другие документы сканируются с бумажных носителей и преобразуются в файл формата tif или pdf. Для направления документов через мобильное приложение допускаются форматы jpeg или xls (xlsx). Многостраничные бумажные документы сканируются и преобразуются в один файл.

На каждый электронный документ, подписанный УКЭП, формируется файл с электронной подписью.

В итоге перед отправкой все документы упаковываются в архив формата zip. Помимо основных документов, в архиве должна присутствовать опись вложения и описание транспортной информации. Оба этих файла должны иметь формат xml.

При направлении документов в ИФНС через специальный сервис на сайте Федеральной налоговой службы необходимо подписать каждый электронный документ электронной подписью. У ИП должен быть оформлен квалифицированный сертификат на имя физического лица. При регистрации юридического лица заявителю также понадобится сертификат электронной подписи, оформленный на физическое лицо. Обычно сертификат оформляется на имя одного из учредителей, который будет выступать заявителем на этапе регистрации компании.

После поступления документы для регистрации проходят контроль в МИ ФНС России по ЦОД. ИФНС, куда подано заявление о регистрации, ежечасно проверяет наличие направленных в её адрес документов для регистрации ИП или юридического лица.

При наличии архива ИФНС его запрашивает, распаковывает и регистрирует. Документы рассматриваются в течение трёх дней. Решение готовится в виде электронного документа, подписанного УКЭП, и направляется заявителю согласно указанным им контактным данным, например на адрес электронной почты.

Юридический адрес ИП: зачем нужен и как зарегистрировать

Понятие юридического адреса применяется только по отношению к организациям. Им может быть офис, склад, магазин, собственное помещение учредителя и даже квартира руководителя, в которой он прописан. В случае с ИП государственные органы не применяют термин «юридический адрес», а говорят и пишут «место жительства физического лица, вставшего на учёт в качестве ИП».

Предприниматель регистрируется только по месту жительства — постоянной прописки или временной регистрации, подтверждённых документами. Это может быть жилое помещение любого типа:

  • квартира;
  • жилой дом;
  • комната;
  • общежитие;
  • служебное жилье;
  • специализированное жилое помещение — приют, дом престарелых или инвалидов.

Прописка ИП указывается в договорах с клиентами, контрагентами и покупателями. С согласия предпринимателя по этому адресу налоговая может провести выездную проверку.

Регистрация ИП невозможна по месту пребывания: например, по адресу гостиницы, хостела, дома отдыха, пансионата, медицинского учреждения и т. п.

Ставить в известность налоговую и другие госорганы не нужно. Но учитывайте, что даже если вы находитесь по другому адресу, почта продолжит приходить по месту прописки ИП. Все письма, отправленные по «юридическому» адресу, считаются автоматически полученными.

Нет. Закон запрещает это, так как арендованные для бизнеса помещения могут не иметь точного адреса, как в случае павильонов в торговом центре.

При этом реальную деятельность можно вести по адресу магазина, мастерской, салона красоты и других объектов, как и снимать офис для работы и встреч с деловыми партнерами. Всё это законно, главное — не забывать, что вся официальная и деловая корреспонденция приходит именно по месту регистрации.

Да, при соблюдении двух условий:

  • у вас есть нотариально заверенная справка о том, что временная регистрация действует минимум 6 месяцев;
  • в паспорте нет штампа о регистрации по прописке.

Такая регистрация влечёт неудобства. Когда срок действия справки закончится, статус ИП будет автоматически аннулирован. Чтобы не допустить этого, нужно своевременно продлить прописку и сообщить об этом в местную налоговую.

Иностранцы и лица без гражданства могут встать на учёт в качестве ИП по адресу, где получили вид на жительство или разрешение на временное пребывание.

Зависит от применяемой системы налогообложения.

  • На УСН, ОСН или ЕСХН регистрация новой точки не нужна, так как вся отчётность и налоги направляются в ту же налоговую инстанцию.
  • На ЕНВД или патенте потребуется регистрация в ФНС по месту нахождения новых точек, поскольку в каждом регионе и даже районе действуют разные коэффициенты для расчёта налога.

Допустим, вы открываете новые точки продаж в двух районах города. Если применяете УСН, не нужно сообщать ФНС о расширении деятельности. А вот если вы на патенте, придётся поставить каждый из филиалов на учёт в налоговых инспекциях соответствующих районов.

С 2011 года не нужно уведомлять ФНС о смене прописки, все изменения вносятся в документы ИП без вашего участия.

Происходит это так:

  • Информацию о смене прописки в ИФНС в течение 10 дней передаёт Федеральная миграционная служба.
  • Далее сотрудники ФНС в течение 5 рабочих дней вносят изменения в ЕГРИП.
  • Через 15 дней изменения должны отобразиться на сайте ФНС — можно зайти и проверить их корректность в ЕГРИП.

Иногда система не срабатывает должным образом или нет возможности ждать 15 рабочих дней. В этих случаях можно самостоятельно подать уведомление в ИФНС о внесении изменений в ЕГРИП. Запрос обработают в течение 5 рабочих дней.

После смены прописки ИП закрепляют за другой налоговой инспекцией. В какую именно — можно посмотреть на сайте ФНС, по новому адресу система автоматически выдаст номер и реквизиты налогового отделения. ИНН и ОГРН остаются прежними, поэтому нет необходимости вставать на учёт повторно.

ИНН — идентификационный код, который присваивается физическому лицу для контроля уплаты налогов. Цифры этого кода не случайны и имеют конкретное значение:

  • первые 2 — указывают на субъект РФ;
  • вторые 2 — устанавливают место регистрации ИП;
  • следующие 6 — уникальны и не повторяются;
  • последние 2 — подтверждают подлинность регистрации.

Чтобы узнать адрес ИП по ИНН, обратитесь с письменным или электронным запросом в налоговую инспекцию и получите выписку из ЕГРИП.

Данные реестра постоянно обновляются — можно получить сведения даже о новых предпринимателях и ликвидированных ИП.

Вот пошаговая инструкция, как узнать адрес ИП с помощью ИНН:

Регистрация ИП в качестве работодателя в 2021

С 2017 года ИП не регистрируются в пенсионном фонде после найма первого сотрудника.

Как было раньше?

До 2017 года ИП регистрировались как работодатели в ПФР и ФСС. С 2017 годы взносы контролирует налоговая. Пенсионный фонд больше не регистрирует ИП-работодателей.

Нужно ли сообщать налоговой о найме сотрудника?

Тоже не нужно. Налоговая говорит об этом в письме. Она и так узнает о сотрудниках ИП из квартальной отчётности по взносам.

Как получить регистрационный номер в ПФР?

Если вы наняли первого сотрудника после 1 января 2017 года, у вас будет только один регномер в ПФР — тот, который выдали сразу после регистрации ИП. Указывайте его в отчётности за сотрудников.

Нужно ли регистрироваться в ФСС?

Да — зарегистрируйтесь в ФСС в течение 30 календарных дней после найма первого сотрудника по трудовому договору. Сообщать о работнике по гражданско-правовому договору нужно только в том случае, если в договоре предусмотрено, что вы платите за сотрудника взносы на травматизм. Для регистрации в ФСС понадобятся:

  • заявление
  • копия вашего паспорта
  • трудовые книжки сотрудников
  • гражданско-правовые договоры, если в них установлены взносы на травматизм.

Вы можете зарегистрироваться в ФСС удалённо, заполнив электронную форму на портале Госуслуг.

О том, как ИП принять первого сотрудника на работу, мы рассказывали раньше. 

👥

Курс молодого работодателя

Начните работать с сотрудниками за 11 уроков

Начать обучение

Нужно ли сниматься с учёта в ФСС?

Если вы уволили всех сотрудников и нанимать новых не собираетесь, то да, с учёта в ФСС можете сняться, чтобы не подавать нулёвки. Для этого в ФСС нужно будет предоставить:

— заявление 

— копии документов, которые подтверждают, что трудовые отношения прекратились: копию соглашения о расторжении договора или копию приказа об увольнении.

Сняться с учёта можно также через Госуслуги. ФСС снимет ИП с учёта в течение 14 дней.

При этом помните, что большинство отчётов нужно будет подавать до конца года всё равно, потому что они строятся нарастающим итогом. Это 6-НДФЛ, 4-ФСС, РСВ и 2-НДФЛ по итогам года. СЗВ-М подавать будет не нужно. 

Статья актуальна на 

08.02.2021

Что делать после регистрации ИП?|Первые шаги после регистрации ИП


Доброго времени суток! В прошлой статье я уже рассмотрел вопрос о том как пройти регистрацию в качестве индивидуального предпринимателя , теперь встает закономерный вопрос «А что дальше ?», какие шаги должен сделать ИП после своей регистрации в налоговой ?

Давайте рассмотрим несколько основных и важных шагов которые должен сделать после своей регистрации каждый ИП.

Действия ИП после регистрации в ИФНС

Порядок действий будет зависеть от некоторых факторов, разберем их:

Регистрация в ПФР и ФСС

После регистрации предпринимателя ИФНС (инспекция федеральной налоговой службы) автоматически передает данные в ПФР (пенсионный фонд России) и ИП нет необходимости проходить регистрацию в ПФР.

Но здесь есть некоторый нюанс, регистрацию в ПФР нет необходимости проходить тем предпринимателям у которых нет работников.

В случае если у Вас есть работники, то Вам необходимо встать на учет в ПФР как работодатель. Регистрация в ПФР как работодателя производится в течении 30 дней.

Относительно ФСС  (фонд социального страхования) ситуация аналогичная, если у Вас нет работников, то Вы не становитесь на учет.

В случае если Вы берете на работу людей, то так же необходимо встать на учет ФСС как работодатель (на это отводится 10 дней с момента заключения трудового договора с человеком).

Выбрать систему налогообложения ИП

После регистрации в качестве ИП необходимо определиться с системой налогообложения которую Вы будете использовать.

ИП в своей деятельности может пользоваться следующими системами налогообложения:

ОСНО, ЕНВД , ПСН, УСН, ЕСХН. Более подробно о системах налогообложения ИП Вы можете ознакомиться в рубрике «Налогообложение для бизнеса».

После регистрации предприниматель автоматически находится на налоге ОСНО и Вы можете использовать для своей деятельности любой другой налоговый режим.

Из перечисленного списка нас интересует налог УСН, дело в том что по закону отводится всего 30 дней с момента регистрации для того чтобы встать на данное налогообложение.

В случае если не успеете, то придется ждать конца календарного года и только после этого можно будет на него перейти.

Так что если Вы решили что будете работать на налоге УСН, то тогда Вам после регистрации ИП необходимо в течении 30 дней сдать в налоговую уведомление о переходе на налог УСН по форме №26.2-1

У остальных систем налогообложения нет жестком привязки к сроку регистрации ИП и открыть Вы сможете их в любой момент.

Совет: В настоящее время многие предприниматели для расчета налогов, взносов и сдачи отчетности онлайн используют данную «Интернет-бухгалтерию». Сервис помог мне сэкономить на услугах бухгалтера и избавил от походов в налоговую. Мне также удалось достать подарочный промокод для подписчиков моего сайта, по которому Вы сможете получить 3 месяца сервиса бесплатно, чтобы по достоинству оценить его. Для этого просто введите промокод 74436115 на странице активации подарка.

Заказать изготовление печати

Сразу оговорюсь: Индивидуальный предприниматель по закону имеет полное право работать без печати ( в таких случаях на месте печати просто ставят б/п, что расшифровывается как БЕЗ ПЕЧАТИ).

Но несмотря на это я рекомендую всем без исключения индивидуальным предпринимателям после регистрации обязательно заказать изготовление печати!

Во первых — это придаст Вашему бизнесу некоторую солидность и во вторых Вы будете уверены, что никто не сможет провернуть с Вашими документами никаких махинаций. Так что не пожалейте денег и закажите себе печать.

Письмо из отдела статистики

После своей регистрации ИП должен посетить так называемый ОТДЕЛ СТАТИСТИКИ и получить там на свое ИП письмо со всеми статистическими данными и кодами.

Данное письмо может Вам потребоваться в дальнейшем, например, для того чтобы открыть расчетный счет в банке, как раз требуют это письмо.

Открыть расчетный счет в банке

Ситуация та же что и с печатью — расчетный счет для ИП открывать не обязательно. И на самом деле он не всегда нужен.

Допустим если Вы просто оказываете услуги частным гражданам, то расчетный счет просто ни к чему.

В случае если Вы оказывая услуги планируете работать с организациями, а так же при торговле и производстве РАСЧЕТНЫЙ СЧЕТ ПРОСТО НЕОБХОДИМ.

Так что стоит позаботиться об его открытии, для этого достаточно обратиться в любой банк который больше придется Вам по душе.

Уведомлять об открытии расчетного счета предприниматель никого не должен. Банки самостоятельно оповещают ИФНС и ПФР.

Приобретение и постановка на учет  кассового аппарата

В зависимости от того какую систему налогообложения Вы выберете может потребоваться приобретение ККТ (контрольно-кассовой техники).

ККТ нужен только при торговле на налогах УСН,  ОСНО и ЕСХН. В случае если Вы используете один из перечисленных видов налогообложения, то приобретайте и ставьте на учет кассовый аппарат.

Постановка кассового аппарата на учет происходит в ИФНС где предприниматель открыл свое ИП.

Регистрация ИП в Роспотребнадзоре Для некоторых видов деятельности предприниматель перед тем как начать ими заниматься должен подготовить и сдать комплект документов в Роспотребнадзор. Подробнее в статье «Регистрация ИП в Роспотребнадзоре».

Вот такие шаги необходимо предпринять после того как Вы зарегистрируете ИП. Сложного тут ничего нет, но лучше эти вопросы решить сразу, чтобы в последующем не отвлекаться на это от своего бизнеса.

Процедура государственной регистрации индивидуального предпринимателя теперь стала еще проще, подготовьте документы на регистрацию ИП совершенно бесплатно не выходя из дома через проверенный мной онлайн сервис: «Регистрация ИП бесплатно за 15 минут».

В случае если что-то не понятно и у Вас возникли сложности и вопросы Вы можете задать их в группе ВК «Секреты бизнеса для новичка», консультации для новичков совершенно бесплатны.

Теперь Вы стали еще на один шаг ближе к своему, я уверен, успешному бизнесу.

На этом все! Удачного бизнеса и пока!

Как открыть ИП, не выходя из дома


Зарегистрироваться в качестве индивидуального предпринимателя самостоятельно может любой житель России, достигший 18 лет.

Сегодня открыть ИП можно, не выходя из дома. При подаче документов через интернет госпошлину платить не нужно. Итак, если вы определились с видом деятельности, начинаем действовать:

Выберите удостоверяющий центр для получения электронной подписи

Электронная подпись (ЭП) – это по сути сертификат, который в мире электронной документации ассоциируется с конкретным пользователем. В законе № 63-ФЗ «Об электронной подписи» от 06.04.2011 прописано три вида ЭП: простая, усиленная и квалифицированная.

Для регистрации ИП нужна именно квалифицированная подпись. Она всегда тождественна документу на бумажном носителе с собственноручной подписью и обеспечивает максимальную защиту информации.

Выдавать электронную подпись могут только удостоверяющие центры, аккредитованные Минкомсвязи РФ. Удостоверяющий центр компании Такском имеет обязательные лицензии и выпускает ЭП с 2002 года, когда вышел первый законодательный акт, регламентирующий употребление ЭП.

Подайте заявление на сертификат ключей ЭП

При заказе ЭП в «Такскоме», её выпуск возможен в течение 60 минут с момента онлайн-загрузки документов и оплаты через интернет.

Специалисты «Такскома» готовы приехать к вам домой. Они привезут готовую ЭП, сверят ваши документы для оформления и настроят софт.

Оформите заявление на регистрацию ИП на сайте ФНС

На сайте ФНС, в сервисе «Государственная регистрация юридических лиц и индивидуальных предпринимателей», пройдите авторизацию и оформите заявление по форме Р21001.

В отдельном окне представлен полный список ОКВЭДов – это коды видов экономической деятельности. Здесь нужно указать один основной код, который соответствует заявленному виду деятельности и дополнительные – на них ограничений не существует.

Будьте внимательны. Именно вид деятельности определит, нужна ли ИП лицензия, а также подскажет режим налогообложения.

С помощью сервиса «Подготовка документов для государственной регистрации» нужно отправить пакет электронных документов. Заявление и документы должны быть подписаны цифровой подписью.

Получите оповещения о регистрации и выберете систему налогообложения

Срок рассмотрения заявления в налоговой составляет три рабочих дня. По итогам регистрации, на электронную почту вы получите лист записи из Единого государственного реестра индивидуальных предпринимателей (ЕГРИП).

После регистрации ИП автоматически находится на ОСНО – общей системе налогообложения, где предприниматель заплатит 13 % с разницы между доходами и расходами.

Если предполагается упрощенная система налогообложения, то подать заявление нужно обязательно в течение 30 дней с момента с регистрации. В личном кабинете ИП на сайте налоговой такая опция есть.

Помните, выбор подходящей системы налогообложения позволит существенно сэкономить на уплате налогов.

Отправить

Запинить

Твитнуть

Поделиться

Поделиться

границ | Модель, основанная на комбинации IFN-γ, IP-10, ферритина и 25-гидроксивитамина D для отличия латентного от активного туберкулеза у детей

Введение

По крайней мере, четверть населения мира инфицирована Mycobacterium tuberculosis (Всемирная организация здравоохранения [ВОЗ], 2018a). Детский туберкулез (ТБ) составляет не менее 10% бремени этой болезни во всем мире, являясь одной из наиболее значительных причин детской заболеваемости и смертности (Всемирная организация здравоохранения [ВОЗ], 2018b).Оценки показывают, что в мире гораздо больше детей с туберкулезом, чем считалось ранее, при этом большинство из них не диагностированы и не получают лечения (Dodd et al. , 2017). Недостаточный диагноз у детей может возникать по нескольким причинам, таким как отсутствие неспецифических клинических проявлений, которые задерживают обращение за медицинской помощью и диагностические подозрения; отсутствие более точного диагностического теста; и плохой географический и финансовый доступ к здравоохранению в некоторых областях (Kyu et al., 2018; Всемирная организация здравоохранения [ВОЗ], 2018a).

Младенцы и дети младшего возраста имеют более высокий риск развития туберкулеза после первичной инфекции M. tuberculosis , обычно из-за контакта ребенка с инфицированным взрослым с активным туберкулезом (Augustynowicz-Kopeć et al., 2012) и развитие тяжелых форм заболевания (Marais et al., 2004). Таким образом, выявление индексных случаев ТБ в домашних условиях вместе с ранним выявлением инфекции и заболевания ТБ с последующим своевременным лечением имеют основополагающее значение для предотвращения прогрессирования заболевания (Dodd et al., 2018).

Диагностика туберкулеза легких — серьезная проблема для детей из-за малобациллярной природы заболевания и трудностей с отхаркиванием. Хотя быстрая молекулярная диагностика представляет собой значительный прогресс в качестве альтернативы традиционным методам микроскопии и посева, ее чувствительность остается неприемлемо низкой у детей, поскольку метод основан на обнаружении M. tuberculosis из респираторных образцов (Всемирная организация здравоохранения [ВОЗ], 2018b) .Что касается иммунодиагностических анализов, то туберкулиновый кожный тест (TST) и тесты высвобождения гамма-интерферона (IGRA) — которые измеряют клеточно-опосредованный иммунный ответ после инфицирования M. tuberculosis — неспособны различить активный ТБ и ЛТИ ( Latorre and Domínguez, 2015) и ограничивают точность обнаружения M. tuberculosis (Dominguez et al., 2009; Velasco-Arnaiz et al., 2018). В результате наиболее активные случаи ТБ диагностируются с помощью клинических — и, если возможно, радиологических — систем оценки, которые имеют ограничения из-за клинических проявлений болезни (Graham et al., 2015).

Незрелая иммунная система маленьких детей добавилась к динамическому процессу взаимодействия хозяина и патогена с инфекцией M. tuberculosis , затрудняя определение перехода от латентной инфекции к острой форме туберкулеза у детей. Недавно было описано разнообразие генетических и индивидуальных факторов, которые могут влиять на исход иммунных установок хозяина во время инфекции M. tuberculosis () (Bastos et al., 2018). Хорошее понимание разнообразия этих факторов может иметь решающее значение для оценки воздействия взаимодействий хозяин-патоген, которые происходят во время M.tuberculosis инфекция. В этом смысле рекомендации ВОЗ по ведению недоедающих детей, а также руководящие принципы для национальных программ борьбы с туберкулезом подчеркивают важность связи недоедания и туберкулеза у детей (Всемирная организация здравоохранения [ВОЗ], 2013). Кроме того, влияние изменений в гомеостазе железа и дефицита витамина D подчеркивает глубокое влияние на иммунную функцию и защиту хозяина из-за механизмов, которые еще не решены. Наконец, сопутствующие заболевания гельминтозов нарушают воспалительные и иммунные механизмы, участвующие в контроле M. tuberculosis (Ibrahim et al., 2017).

В последние годы педиатрические исследования были сосредоточены на поиске новых биомаркеров в образцах без мокроты для выявления инфекции M. tuberculosis (Nicol et al., 2015). Текущие исследования подчеркнули важность различных форм биомаркеров, которые могут быть использованы в иммунологических методах диагностики детского туберкулеза (Togun et al., 2018). Кроме того, появляется все больше данных, показывающих, что модифицированные анализы высвобождения гамма-интерферона (IGRA), основанные на анализе комбинации различных маркеров, могут повысить диагностическую точность (Chegou et al., 2014). Однако только несколько исследований с небольшими когортами выявили некоторые цитокиновые ответы в супернатантах QuantiFERON-TB Gold In-Tube (QFT-GIT, QIAGEN, Германия), которые могут контролировать специфический иммунитет против M. tuberculosis в качестве возможных комбинаций маркеры дискриминации между ЛТИ и активным туберкулезом у детей (Togun et al. , 2018). Несмотря на эти первоначальные подходы, четкая закономерность еще не сложилась, а диагностические характеристики цитокиновых биомаркеров не соответствуют минимальным целевым показателям, рекомендованным ВОЗ для нового диагностического или сортировочного теста на ТБ у детей (Всемирная организация здравоохранения, 2017). .

Насколько нам известно, никакие цитокиновые биомаркеры, основанные на супернатантах QFT-GIT в сочетании с индивидуальными факторами, не могут отличить активный ТБ от ЛТИ у детей. Чтобы повысить точность диагностики туберкулеза, цель этого исследования состояла в том, чтобы охарактеризовать набор цитокинов и ряд индивидуальных факторов (ферритин, 25-гидроксивитамин D [25 (OH) D], паразитарные инфекции и статус питания). и оценить различные модели различения активного ТБ и ЛТИ у детей.

Материалы и методы

Исследуемая популяция

Проспективное исследование случай-контроль проводилось с августа 2015 года по декабрь 2016 года в педиатрической больнице Сен-Дамьен в Порт-о-Пренсе (Гаити). Дети (0–14 лет) с признаками и симптомами, совместимыми с активным туберкулезом и / или задокументированным заражением туберкулезом, были обследованы на предмет подозрения на туберкулез. Согласно больничной программе, братья и сестры (0–14 лет) детей с диагнозом ТБ также обследовались на ТБ или ЛТИ. Дети (0–14 лет) из школы и детского сада были проверены как неинфицированные контрольные. Критериями исключения были: дети с известным иммунодефицитом, получающие иммуносупрессивное лечение в настоящее время, с состоянием, которое потенциально может поставить под угрозу иммунную систему (например,g., дети из онкологии, ревматологии, нефрологии и те, кто перенес трансплантацию органов), дети, которые проходили противотуберкулезное лечение или профилактическое лечение в течение предыдущего года, и дети, не предоставившие информированное согласие.

Была собрана следующая информация: возраст, пол, вес, рост, предыдущая история болезни (включая анамнез ТБ, контакт с туберкулезом, ВИЧ-статус и сопутствующие заболевания, гемограмма), вакцины, а также текущие и предыдущие лекарства (антибиотики, кортикостероиды, противопаразитарные препараты) .

Оценивались следующие признаки и симптомы: кашель и / или лихорадка ≥2 недель (без улучшения по крайней мере после 7-дневного курса амоксициллина), недавняя необъяснимая потеря веса и астения / утомляемость. TST проводился обученным лаборантом. Внутрикожную инъекцию 0,1 мл туберсола (биоэквивалент 5 туберкулиновым единицам; Санофи Пастер, Торонто, ОН, Канада) вводили в вентральную поверхность предплечья и считывали через 72 часа. Положительный результат ТКП определялся как уплотнение ≥10 мм у детей, вакцинированных БЦЖ (с рубцом от БЦЖ), и ≥5 мм у детей, не вакцинированных БЦЖ, или с известным контактом взрослых с ТБ (Bass et al., 1990; Американская академия педиатрии по туберкулезу, 2009 г.). Стандартизованный специфический показатель Z — для определения нутритивного статуса массы тела к возрасту (WAZ) был определен программным обеспечением ВОЗ Anthro Plus 1.0.4 (Всемирная организация здравоохранения [ВОЗ], 2009). Дети с оценкой WAZ ниже -2 стандартного отклонения (SD) были определены как дети с недостаточным весом, а оценка WAZ выше 2 SD была определена как избыточная масса тела.

Рентгенограмма грудной клетки (передне-задний снимок) была выполнена всем детям, прошедшим скрининг на ТБ или ЛТИ.Рентгенограммы грудной клетки были прочитаны двумя внешними экспертами, которые не имели доступа к клиническим данным с использованием стандартизированной формы отчетности, и третьим считывающим устройством для разрешения противоречивых мнений (Graham et al., 2015). Кроме того, в течение трех дней подряд собирали носоглоточный аспират и индуцированную мокроту для исследования мазка (окрашивание аурамином) с помощью прямой флуоресцентной микроскопии у детей с подозрением на активный ТБ. Гистологическое исследование проводилось у детей с подозрением на внегрудной туберкулез (ВТБ) с аденопатиями лимфатических узлов.

Из всех детей, прошедших скрининг на ТБ или ЛТИ, для участия в исследовании были приглашены только те, у которых был положительный результат ТКП и / или микроскопическое подтверждение. Из всех детей, прошедших скрининг в школах, только дети с отрицательным результатом TST были приглашены к участию в исследовании в качестве неинфицированного контроля.

Лечение и профилактическое лечение были назначены всем детям с диагнозом ТБ или ЛТИ соответственно. Во время лечения и профилактики туберкулеза пациенты наблюдались ежемесячно до окончания лечения.Детей с положительным мазком мокроты повторно обследовали на пятом и шестом месяце лечения.

Определения для классификации детей, включенных в исследование

Дети были классифицированы в соответствии с их историей болезни, рентгенограммами грудной клетки, исследованием мазка, молекулярным диагностическим тестом, результатами TST и QFT-GIT. Активные случаи ТБ определялись как подтвержденный ТБ — дети с соответствующими признаками и симптомами и микробиологическим подтверждением M. tuberculosis — и неподтвержденный ТБ — дети без бактериологического подтверждения, но с соответствующими признаками и симптомами, положительными результатами TST и / или QFT-GIT, радиологические данные, свидетельствующие о туберкулезе, известном контакте с туберкулезом и клиническом ответе на противотуберкулезное лечение. В зависимости от локализации туберкулеза активные случаи туберкулеза классифицируются как ETB или внутригрудной туберкулез. Дети с внутригрудным туберкулезом были разделены на детей с поражением легких (ПТБ) и детей с изолированной средостенной лимфаденопатией при отсутствии поражения паренхимы легких (туберкулез средостения). Случаи ЛТИ определялись как дети с задокументированным контактом с ТБ, положительными результатами TST и / или QFT-GIT, нормальными рентгенограммами грудной клетки и отсутствием клинических признаков развития ТБ в последние 6 месяцев после постановки диагноза.Наконец, неинфицированные контрольные группы были определены как дети без симптомов, не имевшие в анамнезе случаев заражения туберкулезом, и с отрицательными TST и QFT-GIT.

Проведены лабораторные испытания

Молекулярный диагностический тест

Образцы мокроты были собраны у детей с подтверждением микроскопии и / или радиологическими данными для выполнения GeneXpert MTB / RIF (Cepheid, США) в соответствии с инструкциями производителя.

Золотая трубка QuantiFERON-TB в трубке

У всех участников был взят образец крови объемом 3 мл для стандартного QFT-GIT; пробирка с антигеном (ESAT-6, CFP-10 и TB-7.7), а также положительный (фитогемагглютинин, митоген) и отрицательный (без антигена, ноль) контроли. Пробирки инкубировали при 37 ° C в течение 16–24 ч и центрифугировали в соответствии с инструкциями производителя. Плазму собирали и хранили при -20 ° C до проведения иммуноферментного анализа (ELISA). После скрининга и набора больных образцы плазмы были отправлены в лаборатории Исследовательского института Germans Trias i Pujol (IGTP, Бадалона, Испания) в оптимальных условиях хранения.Оказавшись там, супернатанты анализировали, и результаты интерпретировали в соответствии с инструкциями производителя.

Ferritin, 25 (OH) D и
Toxocara spp. Обнаружение

Один миллилитр крови всех участников был добавлен в биохимическую пробирку для определения ферритина, 25 (OH) D и Toxocara canis . Концентрации ферритина и 25 (OH) D анализировали в лаборатории биохимии больницы Germans Trias i Pujol (Бадалона, Испания) с помощью метода иммунохемилюминесцентного анализа (CLIA) с использованием прибора Liaison (DiaSorin Liaison, Стиллуотер, Миннесота, США).25 (OH) D — это косвенный метод измерения содержания витамина D в крови. Согласно литературным данным, уровни 25 (OH) D в сыворотке, равные или превышающие 20 нг / мл, считались нормальными уровнями витамина D (Michael and Holick, 2007). Чтобы избежать различий при заборе крови, кровь почти всегда брали в один и тот же день недели примерно в один и тот же час (13–15 часов). Сезонные колебания не повлияли на выборку, поскольку погодные сезоны на Гаити практически не определены. Ig-G-антитела T. canis были обнаружены в лаборатории IGTP с использованием коммерческого набора для ELISA (Ridascreen, R-Biopharm AG, Германия).Результаты с индексом образца выше 1,1 считались положительными в соответствии с инструкциями производителя.

Обнаружение паразитарных инфекций, передаваемых через почву
Для выявления кишечных паразитов у всех участников было собрано

образцов стула. Образцы стула были обработаны в тот же день сбора в лаборатории педиатрической больницы Сен-Дамьена, используя метод Като-Каца и метод формалин-бензин (модификация метода седиментации формалин-эфир), как описано ранее (Katz et al., 1972; Ahmadi and Damraj, 2009) и были исследованы с помощью оптической микроскопии.

Измерение цитокинов

Замороженные супернатанты, оставшиеся от пробирок QFT-GIT, использовали для измерения концентраций цитокинов с помощью мультиплексного анализа на основе шариков (набор цитокинов Luminex 11-plex, R&D Systems, Великобритания) и измеряли с помощью программного обеспечения Bioplex manager (версия 5.0, Bio -Rad, США) согласно инструкции производителя. После экспериментов по оптимизации, гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор (GM-CSF), интерферон (IFN) -gamma (γ), интерлейкин (IL) -2, IL-5, IL-10, IL-13, IL-22, IL-17 и фактор некроза опухоли (TNF) -альфа (α) анализировали в разведении 1: 8, в то время как IL-1RA и индуцированный белок (IP) -10 анализировали в соотношении 1: 8, 1:80, и 1: 160-кратные разведения. Таким образом, значения были в пределах границ обнаружения, отмеченных на стандартной кривой. IL-32 и фактор роста эндотелия сосудов (VEGF) измеряли с помощью DuoSet ELISA (R&D Systems, Великобритания) из-за несовместимости с индивидуальным набором мультиплексных цитокинов человека. ELISA выполняли в соответствии с инструкциями производителя.

Статистический анализ

Качественные переменные были описаны с использованием частот и процентов. Качественные переменные описывались с использованием медианы и межквартильных диапазонов (IQR) или с использованием среднего и стандартного отклонения (SD) в случае, когда переменные были с нормальным распределением, с использованием среднего и стандартного отклонения.Анализируемыми независимыми переменными были: пол, возраст, вес по возрасту, БЦЖ, уровни гемоглобина, уровни 25 (OH) D, уровни ферритина, наличие кишечных гельминтов, антитела IgG T. canis и ответы цитокинов. Концентрацию высвобожденных цитокинов, высвобождаемых в ответ на антигенов M. tuberculosis (Ag-TB) и фитогемагглютинина (PHA), рассчитывали путем вычитания концентрации, измеренной в нулевой пробирке (Ag-TB, антиген минус ноль; и PHA, митоген минус ноль). Для всех переменных с нормальным распределением сравнение между несколькими группами проводилось с использованием дисперсионного анализа или t-критерия Стьюдента (только две группы).Однако для переменных с ненормально распределенными переменными сравнение между группами проводилось с использованием критериев Краскела – Уоллиса и Манна – Уитни. В случае качественных переменных сравнения проводились с использованием точного критерия Фишера или критерия хи-квадрат. Метод Тьюки (нормальное распределение) или метод Бенджамини и Хохберга (ненормальное распределение) использовался для корректировки значений p при множественных сравнениях. Цитокины, которые показали значительные различия между исследуемыми группами, были оценены и рассмотрены.

Была проведена многомерная логистическая регрессия для выявления переменных, позволяющих классифицировать людей по трем различным исследуемым группам (активный ТБ, ЛТИ и незараженные). Для выбора наилучших комбинаций цитокинов использовался прямой метод. Участники с положительным результатом QFT-GIT (TB и LTBI) были проанализированы отдельно (биномиальный) от участников с отрицательным результатом QFT-GIT (TB, LTBI и неинфицированные; полиномиальный). Результаты были выражены с использованием отношения шансов (OR) и их доверительных интервалов.Чувствительность и специфичность были рассчитаны для оценки ценности выполнения диагностического теста. Кривая рабочей характеристики приема (ROC) использовалась для оценки точности диагностики. Оптимальное значение отсечения было определено, чтобы максимизировать разницу между истинно положительными и ложноположительными объектами. Уровень значимости был установлен на уровне 0,05.

Эти анализы были выполнены с использованием статистического программного обеспечения IBM SPSS Statistics v. 25 (SPSS, Чикаго, Иллинойс, США), R package v.3.0.5 (Фонд R для статистических вычислений, Вена, Австрия) и GraphPad PRISM v. 5 (GraphPad Software, Inc. , Сан-Диего, Калифорния, США).

Результаты

Объекты исследования

Всего в больнице прошли обследование 305 детей с подозрением на ЛТИ или ТБ, в то время как 96 неинфицированных детей прошли обследование в школе и детском саду. Среди пациентов, прошедших скрининг в больнице, было набрано 156, и 149 были исключены, потому что они не соответствовали критериям включения (информированное согласие не получено, отрицательный результат ТКП).Из 156 участников 111 (71,2%) были проанализированы в исследовании, а 45 (28,8%) были потеряны для последующего наблюдения и поэтому не были включены в анализ из-за отсутствия дополнительных тестов, необходимых для клинической оценки (грудная клетка). рентгенограммы, биопсии). Среди детей, прошедших скрининг в школе и детском саду, 55 были набраны и проанализированы, а 41 был исключен, потому что они не соответствовали критериям включения (информированное согласие не получено, ТКП положительный результат). Из 166 проанализированных детей (111 прошли обследование в больнице и 55 — в школе и детском саду) 74 были больны активным туберкулезом (44. 6%), у 37 был ЛТИ (22,3%), а у 55 не было инфекции (33,1%). Из 74 случаев активного туберкулеза у 8 был ЭТБ, а у 66 — внутригрудной туберкулез. Среди детей с внутригрудным туберкулезом у 48 был туберкулез, а у 18 — туберкулез средостения (рис. 1).

Рисунок 1. Блок-схема регистрации. Туберкулез, туберкулез; ЛТБИ, латентная туберкулезная инфекция; ЭТБ, внегрудной туберкулез; ПТБ, внутригрудной туберкулез с поражением легких; Туберкулез средостения, внутригрудной туберкулез с изолированной лимфаденопатией средостения при отсутствии поражения паренхимы легких.

Таблица 1 показывает описание, демографические и клинические характеристики среди исследуемых групп в соответствии с их результатами QFT-GIT. Значительные различия наблюдались по возрасту и WAZ z -баллов ( p = 0,001 и p = 0,001, соответственно) среди исследуемых групп с разными результатами QFT-GIT (положительными, отрицательными и неопределенными). В то время как случаи ЛТИ с положительным результатом QFT-GIT были старше, чем случаи активного ТБ с отрицательным результатом QFT-GIT ( p = 0. 002), случаи активного ТБ с положительным результатом QFT-GIT имели более низкие оценки WAZ z , чем неинфицированные контроли ( p = 0,001). Однако сравнения результатов QFT-GIT в каждой исследуемой группе (ТБ, ЛТИ и неинфицированные) были выполнены, и никаких существенных различий не наблюдалось.

Таблица 1. Описание и сравнение демографических и клинических характеристик исследуемых групп по результатам QFT-GIT.

Характеристика субъектов с положительным результатом теста QFT-GIT

Были выполнены сравнения между группами с активным ТБ и положительным результатом QFT-GIT (Таблица 2).Уровни Ag-TB IL-17A, GM-CSF вместе с уровнями PHA TNF-α, GM-CSF и IL-13 и средними уровнями гемоглобина показали значительные различия между группами активного TB ( p = 0,009 , p = 0,027, p = 0,027, p = 0,040 и p = 0,042, p = 0,006 соответственно). Кроме того, попарные сравнения показали, что уровни Ag-TB IL-17A и GM-CSF вместе с уровнями PHA TNF-α и IL-13 были выше у детей с туберкулезом средостения, чем у детей с PTB ( p = 0. 009 и 0,042, p = 0,025 и p = 0,050 соответственно). Аналогичным образом, уровни гемоглобина были значительно выше у детей с туберкулезом средостения, чем у детей с PTB или ETB ( p = 0,014 и p = 0,014, соответственно). Ни один биомаркер не показал значимых различий между группами PTB и ETB. Поэтому группы детей с ЛТБ и внелегочным ТБ были объединены и проанализированы как единая группа (ТБ, n = 44), а дети с ТБ средостения ( n = 18) были проанализированы отдельно.

Таблица 2. Описание и сравнение демографических, клинических и цитокиновых ответов среди больных активным ТБ с положительным результатом QFT-GIT.

Были выполнены сравнения между группой TB ( n = 44) и случаями LTBI с положительным результатом QFT-GIT ( n = 22) (Таблица 3). Уровни Ag-TB IP-10 вместе с уровнями ферритина были значительно выше у детей с ТБ, чем у детей с ЛТИ ( p = 0,005 и p = 0.019 соответственно). Однако уровни PHA IFN-γ были значительно ниже у детей с туберкулезом, чем у детей с LTBI ( p <0,001). Хотя нулевые уровни ИЛ-5 показали значительные различия между группами ( p = 0,007), этот цитокин не учитывался в анализе, потому что почти все результаты случаев ЛТИ (20/22) и более половины результатов пациентов с ЛТИ (20/22) дети, принадлежащие к группе ТБ (24/44), были ниже стандартной кривой. Относительно объединения т.canis с IL-5, не было обнаружено значительных различий между уровнями Ag-TB, PHA и нулевого IL-5 и T. canis в группах с положительным QFT-GIT ( p — значения 0,202, 0,508 и 0,053 соответственно). Кроме того, было определено количество эозинофилов, но поскольку только 25% детей имели количество эозинофилов, эта переменная не была включена в анализ исследования. Несмотря на немногочисленные результаты, не было обнаружено значительных различий между уровнями Ag-TB, PHA и нулевым IL-5 и количеством эозинофилов в группах с положительным результатом QFT-GIT ( p -значения 0. 848, 0,923 и 0,768 соответственно).

Таблица 3. Описание и сравнение демографического, клинического и цитокинового ответа между группами с положительным результатом QFT-GIT.

Характеристика субъектов с отрицательным результатом теста QFT-GIT

Были выполнены сравнения среди случаев активного ТБ ( n = 9), случаев ЛТИ ( n = 12) и неинфицированных контролей ( n = 55) с отрицательным результатом QFT-GIT ( n = 22) (Таблица 4). Уровни PHA IL-10, IL-13 и IL-32 вместе с нулевыми уровнями TNF-α и IL-10, уровнями недостаточной массы тела и уровнями 25 (OH) D показали значительные различия ( p < 0.001, p = 0,007 и p = 0,004, p = 0,001 и p = 0,044, p = 0,001 и p = 0,037 соответственно). Кроме того, парные сравнения показали, что уровни PHA IL-10 были значительно выше в случаях туберкулеза и LTBI, чем в неинфицированной контрольной группе ( p = 0,020 и p = 0,001, соответственно), тогда как уровни PHA IL-32 были значительно выше. выше в случаях ЛТИ, чем в случаях ТБ, и в неинфицированной контрольной группе ( p = 0.034 и p = 0,004 соответственно), а уровни PHA IL-13 были значительно выше в случаях LTBI по сравнению с неинфицированным контролем ( p = 0,006). В противном случае нулевые уровни TNF-α были значительно выше в неинфицированном контроле по сравнению со случаями LTBI ( p <0,001). Что касается уровней недоедания, баллы WAZ z были значительно ниже в случаях ТБ и ЛТИ, чем в неинфицированной контрольной группе ( p = 0,006 и p = 0,006, соответственно).Напротив, медиана уровня 25 (OH) D была значительно выше в случаях ЛТИ по сравнению с неинфицированным контролем ( p = 0,022).

Таблица 4. Описание и сравнение демографического, клинического и цитокинового ответа между группами с отрицательным результатом QFT-GIT.

Профили дискриминационных биомаркеров у субъектов с положительным результатом QFT-GIT

Скорректированная логистическая модель показала набор из 4 биомаркеров, способных различать активный ТБ и ЛТИ: ферритин, 25 (OH) D, IP-10 и IFN-γ (Таблица 5).

Таблица 5. Классификационная таблица модели для исследуемых групп с положительными результатами QFT-GIT и переменными, включенными в уравнение.

Для каждой увеличенной единицы IFN-γ (в ответах на Ag-TB), IP-10 (в ответах на Ag-TB и PHA), ферритина и 25 (OH) D шансы быть классифицированными как случай ТБ увеличиваются на 1.08, 1.80, 1.13, 1.02 и 1.22 соответственно. Однако для каждой увеличенной единицы IFN-γ (в ответах PHA) шансы быть классифицированным как случай ТБ уменьшались на 0.46. ​​Следовательно, профиль для классификации субъекта с туберкулезом, но не с LTBI, состоит из низких уровней IFN-γ (в ответах PHA), но высоких уровней IP-10 (в ответах Ag-TB и PHA), 25 (OH) D и уровни ферритина.

Модель, основанная на четырех упомянутых выше маркерах хозяина, смогла правильно классифицировать 93,2% детей с ТБ и 90,0% детей с ЛТИ. Кроме того, площадь под кривой ROC этой модели составляла 0,955 (ДИ 95%: от 0,91 до 1,00), а отношение правдоподобия положительного и отрицательного составляло 9,32 и 0. 08 соответственно (рисунок 2). Кроме того, когда был включен ТБ средостения, модель правильно отнесла 76,2% из них к группе ТБ. Дополнительная таблица 1 суммирует диагностические характеристики различных возможностей комбинации четырех маркеров хозяина, выбранных в скорректированной логистической модели.

Рисунок 2. Кривая ROC для четырех маркеров, представленных в модели [IFN-γ, IP-10, Ферритин и 25 (OH) D], чтобы различать активный ТБ ( N = 44) и латентно инфицированный ТБ. случаев ( N = 37) с положительным результатом QuantiFERON-TB Gold In-Tube.AUC, площадь под кривой ROC.

Профили дискриминационных биомаркеров у субъектов с отрицательным результатом QFT-GIT

Скорректированная логистическая модель показала набор из 3 биомаркеров, способных различать активный ТБ, ЛТИ и неинфицированный контроль: ИЛ-10, ИЛ-13 и ИЛ-32 (Таблица 6). Для каждой увеличенной единицы IL-13 и IL-32 (в ответах PHA) шансы быть классифицированным как случай LTBI увеличились на 1,003 и 1,003, соответственно. Однако для каждой увеличенной единицы IL-10 (в ответах PHA) шансы быть классифицированным как неинфицированный контроль уменьшались на 0.93 и 0,01 соответственно.

Таблица 6. Классификационная таблица для исследуемых групп с отрицательными результатами QFT-GIT и переменными, включенными в уравнение.

Комбинация уровней PHA IL-10, IL-13 и IL-32 выявила 11,1% случаев активного ТБ, 50,0% случаев ЛТИ и 96,4% неинфицированных контрольных групп.

Обсуждение

Это исследование было направлено на выявление многообещающих маркеров, позволяющих отличить активный ТБ от ЛТИ у детей. Мы получили комбинацию на основе IP-10, IFN-γ, ферритина и 25 (OH) D, которая показала диагностический потенциал и прогностическую ценность выше рекомендованных минимальных профилей целевых продуктов (TPP).

Цитокинов в

M. tuberculosis Инфекция и активное заболевание

Хотя IGRA стали стандартным методом диагностики инфекции M. tuberculosis , один IFN-γ не может отличить ТБ от ЛТИ (Denkinger et al., 2015; Latorre and Domínguez, 2015; Pai and Behr, 2016). ). Предыдущие исследования показали доказательства низкой чувствительности IGRA у людей с подавленной или незрелой иммунной системой, таких как пациенты с ослабленным иммунитетом или маленькие дети (Latorre et al., 2014). В нашем исследовании очень низкие уровни цитокинов Ag-TB были обнаружены у субъектов с отрицательным QFT-GIT по сравнению с пациентами с положительным QFT-GIT. Следовательно, ни один цитокин или комбинация цитокинов не продемонстрировали возможности различения между неинфицированным контролем и инфицированных M. tuberculosis детей с отрицательным результатом QFT-GIT. Этот вывод согласуется с данными Lighter-Fisher et al., Которые сообщили, что у детей с ЛТИ до 5 лет были отрицательные результаты QFT-GIT и очень низкие уровни цитокинов (Lighter-Fisher et al., 2010). Эти результаты подтверждают ослабленный иммунный ответ детей раннего возраста в плане защиты от M. tuberculosis и, следовательно, их предрасположенность к развитию туберкулеза. Напротив, в настоящем исследовании были обнаружены статистически значимые различия между маркерами, потенциально способными диагностировать ТБ и отличать активный ТБ от ЛТИ у инфицированных M. tuberculosis детей с положительным результатом QFT-GIT.

Поскольку дети становятся более восприимчивыми к развитию внутригрудных заболеваний и заболеваний ETB после воздействия M.tuberculosis , несколько исследований изучали паттерны экспрессии различных биомаркеров, чтобы понять прогрессирование внутригрудных заболеваний и заболеваний ETB у детей (Whittaker et al., 2012). Подобно Kumar et al. (2013) в настоящем исследовании ни один из маркеров не смог различить субъектов с внутригрудным туберкулезом и ETB (Kumar et al., 2013). Хотя субъекты с туберкулезом средостения показали иммунный профиль, аналогичный профилю внутригрудного и ETB, пять биомаркеров (IL-17, GM-CSF, TNF-α, IL-13 и ферритин) показали потенциал для выявления субъектов с туберкулезом средостения в группе TB. Рентгенологические признаки туберкулеза средостения связаны с началом первичного туберкулеза у детей (Thomas, 2019). Учитывая, что туберкулез представляет собой динамический континуум состояний, в которых дихотомическое различие между инфекцией и заболеванием часто трудно дифференцировать (Perez-Velez et al., 2017), предыдущие цитокины предполагают возможность выявления детей, инфицированных M. tuberculosis . наиболее вероятно прогрессирование заболевания и / или ранней стадии туберкулеза.

У субъектов с положительным результатом QFT-GIT индивидуальные ответы на IP-10, IFN-γ, IL-5 и ферритин показали статистически значимые различия между активным ТБ и ЛТИ.Однако комбинация IP-10, IFN-γ, ферритина и 25 (OH) D дала наилучшие диагностические возможности для различения случаев активного ТБ и случаев ЛТИ. IP-10 и IFN-γ играют важную роль в иммунном ответе на инфекцию M. tuberculosis (Chegou et al., 2014). В нескольких исследованиях описана хорошая эффективность IP-10 в сравнении или в сочетании с IFN-γ для диагностики туберкулеза и различия между туберкулезом и латентным туберкулезом у детей, соответственно (Ruhwald et al. , 2012; Villar-Hernandez et al., 2017). В то время как IP-10 представляет собой хемокин, участвующий в транспортировке и стимуляции моноцитов и клеток Th2, активируемых в ответ на воспалительные очаги, IFN-γ необходим для опосредования адаптивного иммунного ответа против M. tuberculosis (Ruhwald et al., 2008 г.). В отличие от IFN-γ, IP-10 вызывает устойчивый специфический ответ на M. tuberculosis , не зависящий от возраста (Ruhwald et al., 2012). Действительно, согласно предыдущим исследованиям, IP-10 демонстрирует ту же кинетику, что и IFN-γ, но на уровнях до 10 раз выше (Lighter et al., 2009; Ruhwald et al., 2011).

Предыдущие исследования с участием взрослых и детей, инфицированных M. tuberculosis , наблюдали вариации цитокиновых ответов после ФГА-стимуляции (Mueller et al., 2008; Ruhwald et al., 2008, 2011; Alsleben et al., 2012; Jeong et al. ., 2015). В нашем исследовании уровни ИФН-γ в PHA были значительно выше в случаях ЛТИ по сравнению со случаями ТБ. Подобные результаты наблюдались у взрослых, инфицированных M. tuberculosis , кровь которых была стимулирована пептидами QFT-GIT (Jeong et al., 2015). Следовательно, реакции, индуцированные PHA, рассматривались для оценки иммунного статуса хозяина для различения ТБ и ЛТИ у детей. С другой стороны, в этом исследовании уровни PHA IP-10 были очень похожи на уровни, полученные при специфической стимуляции M. tuberculosis-. В связи с этим Ruhwald et al. (2008) предположили, что ФГА является мощным индуктором IFN-γ. Однако этого не наблюдалось с IP-10, с которым уровни PHA были довольно низкими.

В нашем исследовании уровни ИЛ-5 в нестимулированных образцах показали статистически значимые различия между случаями ТБ и ЛТИ.Однако этот цитокин не экспрессировался постоянно. Исследования на взрослых показали способность ИЛ-5 различать случаи ТБ и ЛТИ (Won et al., 2017). Однако диагностическая ценность IL-5 для детей относительно неизвестна (Armand et al., 2014).

В этом исследовании уровни цитокинов были измерены в супернатантах, оставшихся от пробирок QFT-GIT. Недавно QuantiFERON-TB ® Gold Plus (QFT-Plus) был представлен в новом поколении анализа QFT. Для этого нового теста есть две пробирки с антигенами, специфичными для ТБ, которые называются TB1 и TB2.Пробирка TB1 содержит длинные пептиды, полученные из ESAT-6 и CFP-10 (для этого нового теста был удален пептид TB-7.7), и она предназначена для индукции специфического ответа Т-лимфоцитов CD4. TB2 содержит как одинаковые длинные пептиды TB1, так и недавно разработанные более короткие пептиды для индукции продукции интерферона (IFN) -g как CD4, так и CD8 Т-клетками (Barcellini et al., 2016). Определение этих биомаркеров может быть выполнено с использованием пробирки TB1 из анализа QFT-Plus, поскольку она содержит почти такие же относительно длинные пептиды из M.tuberculosis (ESAT-6 y CFP-10) в основном для стимуляции CD4 + Т-клеток, как те, которые используются в антигенной пробирке для анализа QFT-GIT. Хотя QFT-Plus не содержит антигенов TB7.7, было показано, что отсутствие антигена TB7. 7 в QFT-Plus не оказывает значительного влияния на эффективность анализа (Theel et al., 2018).

Индивидуальные факторы в

M. tuberculosis Инфекция и болезнь

Механизм, с помощью которого хозяин, патогены и внешние факторы взаимодействуют как окончательные детерминанты исхода заболевания и передачи ТБ, является активной областью исследований (Bastos et al., 2018). В этом контексте мы охарактеризовали ряд индивидуальных факторов, среди которых ферритин и 25 (OH) D были маркерами, которые показали возможность дискриминации между активным ТБ и ЛТИ у детей.

Железо является важным кофактором для размножения микобактерий во время инфекции (Olakanmi et al., 2000) и успешного защитного иммунного ответа хозяина (Mainou-Fowler and Brock, 1985). Известно, что белки острой фазы стимулируют или подавляют их производство в ответ на воспалительные процессы, такие как инфекции.В нашем исследовании уровень ферритина у больных ЛТИ был ниже, чем у больных туберкулезом в активной форме. Предыдущие результаты нашей группы показали более низкие уровни ферритина у детей с положительным результатом QFT-GIT в начале инфекции M. tuberculosis (Pérez-Porcuna et al., 2014). Подобные исследования показали более высокие медианные уровни ферритина у взрослых больных туберкулезом, чем в других исследовательских группах (Jacobs et al., 2016). Возможное объяснение этого результата заключается в том, что ферритин является признанным белком острой фазы в процессах накопления железа и тесно связан с ответом хозяина в M.tuberculosis (Thom et al., 2012).

В настоящем исследовании не было обнаружено статистически значимых различий только для 25 (OH) D между исследуемыми группами. Витамин D — это стероидный гормон, обладающий плейотропным действием во многих тканях и клетках организма, включая клетки иммунной системы (Nair et al., 2018). Несколько исследований показывают, что дефицит 25 (OH) D (ниже 20 нг / мл) может поставить под угрозу антибактериальную активность и повысить риск заболевания туберкулезом, предотвращая инициирование иммунного ответа, опосредованного витамином D (Hewison, 2012).

Было обнаружено, что анализ 25 (OH) D в комбинации с IP-10, IFN-γ и ферритином полезен для различения случаев активного ТБ и ЛТИ. Мы наблюдали обратную корреляцию между уровнями 25 (OH) D и PHA IFN-γ в случаях активного ТБ по сравнению со случаями LTBI. Исследования in vitro продемонстрировали, как витамин D вызывает врожденные противомикробные реакции и подавляет провоспалительные цитокиновые ответы (Coussens et al., 2012). Аналогичным образом, Ragab et al. (2016) наблюдали отрицательную связь между добавлением витамина D и уровнями ИФН-γ, индуцированными ФГА (Nonnecke et al., 2003), предполагая множественные механизмы, в которых витамин D участвует в защите организма-хозяина от инфекции M. tuberculosis .

Перспективные диагностические тесты на основе биомаркеров у детей

Недавний систематический обзор Togun et al. (2018) оценили биомаркеры, позволяющие диагностировать туберкулез у детей. Все исследования, проведенные в супернатантах QFT-GIT, представили по крайней мере комбинацию двух маркеров для различения активного ТБ и ЛТИ у детей, демонстрируя участие нескольких механизмов, опосредованных разными маркерами хозяина в M. tuberculosis инфекция и болезнь (Togun et al., 2018).

В нескольких исследованиях было высказано предположение, что IL-2 и TNF-α могут быть надежными цитокинами для различения случаев активного ТБ и ЛТИ у детей (Lighter-Fisher et al., 2010; Gourgouillon et al., 2012). Однако мы не обнаружили каких-либо значительных различий в TNF-α, а ответы IL-2 в нестимулированных и стимулированных образцах были ниже, чем минимальные концентрации, обнаруженные на стандартной кривой эксперимента. Хотя наши результаты могут не совпадать с некоторыми, в основном, ранее цитированными наблюдениями, прямые сравнения биомаркеров среди исследований у детей сложны из-за изменчивости популяции, бремени M.tuberculosis представлены в различных условиях и возрастных вариациях, которые могут повлиять на состояние зрелости иммунного ответа ребенка.

Что касается возможного использования биомаркеров в полевых условиях, учитывая TPP, рекомендованные FIND / ВОЗ, чувствительность и специфичность, достигаемые комбинацией IFN-γ, IP-10, ферритина и 25 (OH) D, были оптимальными (Denkinger et al. ., 2015). В последние годы в двух исследованиях случай-контроль были представлены две модели диагностики туберкулеза у детей с минимальными значениями TPP, превышающими те, которые были достигнуты в этом исследовании для разработки нового диагностического теста (Armand et al., 2014; Чжоу и др., 2017). Однако они не смогли различить случаи активного ТБ и ЛТИ. В нашем исследовании комбинация IP-10, IFN-γ, ферритина и 25 (OH) D дала наилучшие диагностические характеристики при правильной классификации случаев активного ТБ (93,2%) и случаев ЛТИ (90,0%). Более того, эта комбинация биомаркеров правильно классифицировала 76,2% пациентов с туберкулезом средостения. Наконец, эта комбинация может быть хорошим диагностическим тестом для подтверждения активного ТБ (LR + = 9,32) и очень надежным тестом для исключения случаев активного ТБ из случаев с LTBI (LR− = 0.08).

Ограничения и сильные стороны исследования

Одним из ограничений исследований, оценивающих диагностические тесты на туберкулез у детей, является отсутствие золотого микробиологического стандарта и адекватных, проверенных систем клинической оценки, что приводит к низкой диагностической чувствительности у детей. В этом исследовании ТКП была определена как критерий включения детей, прошедших скрининг на ТБ и ЛТБИ, с целью улучшения классификации пациентов. Однако упомянутый выше критерий включения мог повлиять на специфичность диагностики некоторых групп риска с уязвимой иммунной системой, включая детей с недостаточным питанием.Несмотря на попытку контролировать большинство факторов риска, уязвимость исследуемой популяции и контекст не позволили оценить некоторые факторы, которые могут повлиять на иммунную систему (например, цитомегаловирус и аллергии). Важной сильной стороной этого исследования являются строгие критерии классификации исследуемых групп (Graham et al., 2015). Следует отметить, что в этом исследовании случай-контроль широко были представлены размер выборки, возрастные диапазоны в зависимости от пола и статуса питания. Однако, согласно полученным результатам, необходимы дополнительные исследования для проверки эффективности текущей модели у детей с другими респираторными инфекциями. Идентификация этих биомаркеров имеет ту же техническую сложность, что и выполнение анализа QFT-GIT. Однако комбинация биомаркеров, представленная в этом исследовании, также может иметь большой потенциал для различения ТБ и ЛТИ у детей. С этой целью следует провести будущие исследования, подтверждающие идентификацию биомаркеров, предложенных в этом исследовании, в других географических районах и различных популяциях.

Заключение

Наши результаты свидетельствуют о диагностическом потенциале комбинации IFN-γ, IP-10, ферритина и 25 (OH) D, обнаруженных в супернатантах в пробирках QFT-GIT, для диагностики детского ТБ и различения между ТБ и ЛТИ.Кроме того, эти маркеры могут быть полезны для выявления начала первичного туберкулеза, хотя необходимы дальнейшие исследования в рамках поперечных и проспективных продольных исследований. В этом исследовании выделяются потенциальные маркеры с оптимальной диагностической точностью для улучшения диагностики ТБ у детей. Наконец, разработка быстрого диагностического теста, основанного на изученных иммунологических биомаркерах, улучшит доступ к противотуберкулезным службам, тем самым способствуя ранней диагностике детского ТБ и ЛТИ.

Заявление об этике

Это исследование было одобрено Комитетом по этике медицинских исследований Университета Барселоны и Гаитянским национальным комитетом по этике (номер проекта IRB00003099). Перед участием было получено письменное информированное согласие родителей или опекуна ребенка.

Авторские взносы

PC-d-B, CA, TP-P, RA и JD разработали и разработали исследование. PC-d-B, MJC, MN и JG собрали данные. PC-d-B, RV-H, RA, TP-P, IL, LCA, BSM и JD проанализировали и интерпретировали данные.Составителями статьи были PC-d-B, TP-P, RA, JD и RV-H. Все авторы участвовали в анализе данных, составлении и редактировании документа и соглашаются нести ответственность за все аспекты работы.

Финансирование

Эта работа была поддержана грантами: (i) фонда Isolana, (ii) фонда Марии Франциски де Ровиралта, целесообразного AT / MA 1-19 / 07/2017, AT / MA 70-27 / 04/2016 и AT / MA 3-22 / 10/2014, (iii) Instituto de Salud Carlos III (PI-16/1912), интегрированный в Национальный план I + D + I и соучредитель ISCIII-Subdirección General de Evaluación и Региональный европейский фонд Desarrollo (FEDER), (iv) Программа CERCA / Generalitat de Catalunya, (v) el Departament de Salut de la Generalitat de Catalunya, en la convocatòria corrective a l’any 2017 de concessió de subvencions del Pla Estratègic de Recerca i Innovació en Salut (PERIS) 2016-2020 modalitat intesificació профессионалы de salut effient SLT006 / 17/144, и (vi) Fundació Recerca i Docència Mútua Terrassa.

Заявление о конфликте интересов

Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могут быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Благодарности

Мы благодарим сотрудников (особенно г-на Луи Ив и г-жу Ахил Нанси, медсестер и лаборантов) педиатрической больницы Сен-Дамьен Фонда Nos Petits Frères et Soeurs, Порт-о-Пренс, за их безоговорочную поддержку на протяжении всего исследования. проект, а также за ценную помощь и заботу при наборе пациентов для этого исследования.Мы благодарим г-на Мовила Жуниора Уилфрида из Министерства государственной государственной власти в Гаити за его помощь во время домашнего скрининга детей, контактировавших с домашним туберкулезом. Наконец, мы также благодарим доктора Жауме Олле Гойга из ассоциации ACTMON за его поддержку противотуберкулезного отделения больницы Сен-Дамьен, которая оказала косвенное положительное влияние на этот проект. Спонсоры не принимали участия ни в одном из этапов исследования, от его разработки до подачи рукописи в публикацию.

Дополнительные материалы

Дополнительные материалы к этой статье можно найти в Интернете по адресу: https: // www.frontiersin.org/articles/10.3389/fmicb.2019.01855/full#supplementary-material

Список литературы

Ахмади, Н. А., и Дамрадж, Ф. А. (2009). Полевая оценка формалино-бензинового метода определения концентрации стула для выявления кишечных паразитов. Parasitol. Res. 104, 553–557. DOI: 10.1007 / s00436-008-1229-1224

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Alsleben, N., Ruhwald, M., Rüssmann, H., Marx, F. M., Wahn, U., и Магдорф, К. (2012). Интерферон-гамма-индуцибельный белок 10 как биомаркер активного туберкулеза и латентной туберкулезной инфекции у детей: исследование случай-контроль. Сканд. J. Infect. Дис. 44, 256–262. DOI: 10.3109 / 00365548.2011.632644

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Американская академия педиатрии по туберкулезу (2009 г.). Красная книга: Отчет Комитета по инфекционным болезням 2009 г. , 28-е изд. Деревня Элк-Гроув, Иллинойс: Медицинская группа AMITA Health.

Google Scholar

Armand, M., Chhor, V., de Lauzanne, A., Guérin-El Khourouj, V., Pédron, B., Jeljeli, M., et al. (2014). Ответы цитокинов на пептиды квантиферона при детском туберкулезе: пилотное исследование. J. Infect. 68, 62–70. DOI: 10.1016 / j.jinf.2013.08.005

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Августинович-Копец, Э., Ягельски, Т., Козиньска, М., Кремер, К., ван Сулинген, Д., Белецкий, Дж. И др. (2012). Передача туберкулеза в семьях-домохозяйствах. J. Infect. 64, 596–608. DOI: 10.1016 / j.jinf.2011.12.022

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Barcellini, L., Borroni, E., Brown, J., Brunetti, E., Codecasa, L., Cugnata, F., et al. (2016). Первая независимая оценка эффективности QuantiFERON-TB Plus. евро. Респир. J. 47, 1587–1590. DOI: 10.1183 / 13993003.02033-2015

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Басс, Дж. Р., Фарер, Л. С., Хоупвелл, П. С., Джейкобс, Р. Ф., и Снайдер, Д. Э. младший (1990). Американское торакальное общество. стандарты диагностики и классификация туберкулеза. г. Преподобный Респир. Дис. 142, 725–735. DOI: 10.1164 / ajrccm / 142.3.725

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Бастос, Х. Н., Осорио, Н. С., Ганье, С., Комас, И., и Сараива, М. (2018). Тройка хозяин-патоген-внешние факторы при туберкулезе: модуляция воспаления и клинические исходы. Фронт.Иммунол. 8: 1948. DOI: 10.3389 / fimmu.2017.01948

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Chegou, N. N., Heyckendorf, J., Walzl, G., Lange, C., and Ruhwald, M. (2014). За горизонтом IFN-γ: биомаркеры для иммунодиагностики инфекции микобактериями туберкулеза. евро. Респир. J. 43, 1472–1486. DOI: 10.1183 / 0

36.00151413

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Куссенс, А.К., Уилкинсон, Р.Дж., Ханифа Ю., Николаевский В., Элкингтон П. Т., Ислам К. и др. (2012). Витамин D ускоряет разрешение воспалительных реакций во время лечения туберкулеза. Proc. Natl. Акад. Sci. США 109, 15449–15454. DOI: 10.1073 / pnas.1200072109

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Денкингер, К. М., Кик, С. В., Чирилло, Д. М., Казенги, М., Шинник, Т., Вейер, К. и др. (2015). Определение потребностей в тестах нового поколения на туберкулез. J. Infect. Дис. 211, S29 – S38. DOI: 10.1093 / infdis / jiu821

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Додд П. Дж., Юэн К. М., Бесерра М. К., Ревилл П., Дженкинс Х. Э. и Седдон Дж. А. (2018). Потенциальное влияние управления домашними контактами на детский туберкулез: исследование с математическим моделированием. Ланцет Глоб. Лечить. 6, e1329 – e1338. DOI: 10.1016 / S2214-109X (18) 30401-7

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Додд П.Дж., Юэн, К. М., Сисманидис, К., Седдон, Дж. А., и Дженкинс, Х. Э. (2017). Глобальное бремя детской смертности от туберкулеза: исследование с математическим моделированием. Ланцет Глоб. Лечить. 5, e898 – e906. DOI: 10.1016 / S2214-109X (17) 30289-89

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Домингес Дж., Латорре И., Альтет Н., Матео Л., Де Соуза-Гальвао М., Руис-Манзано Дж. И др. (2009). Анализ высвобождения гамма-интерферона для диагностики туберкулеза у лиц с ослабленным иммунитетом. Эксперт Ред. Респир. Med. 3, 309–327. DOI: 10.1586 / ers.09.20

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Гургуийон, Н., Де Лозанн, А., Коттарт, К. Х., Кури, Э., Дебор, К., Герен-Эль Хурудж, В., и др. (2012). Отношение TNF-α / IL-2 позволяет отличить латентный туберкулез от активного у иммунокомпетентных детей: пилотное исследование. Педиатр. Res. 72, 370–374. DOI: 10.1038 / pr.2012.89

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Грэм, С.М., Куэвас, Л. Е., Жан-Филипп, П., Браунинг, Р., Казенги, М., Детжен, А. К. и др. (2015). Определения клинических случаев для классификации внутригрудного туберкулеза у детей: обновленная информация. Clin. Заразить. Дис. 61, S179 – S187. DOI: 10.1093 / cid / civ581

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ибрагим, М. К., Замбруни, М., Мелби, К. Л., и Мелби, П. К. (2017). Влияние детского недоедания на защиту хозяина и инфекцию. Clin. Microbiol.Ред. 30, 919–971. DOI: 10.1128 / CMR.00119-6

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Джейкобс, Р., Маасдорп, Э., Малерб, С., Локстон, А. Г., Стэнли, К., Ван дер Спай, Г. и др. (2016). Диагностический потенциал новых биомаркеров слюны хозяина как кандидатов для иммунологической диагностики туберкулеза и мониторинга ответа на лечение туберкулеза. PLoS One 11: e0160546. DOI: 10.1371 / journal.pone.0160546

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Jeong, Y.Х., Хур, Ю. Г., Ли, Х., Ким, С., Чо, Дж. Э., Чанг, Дж. И др. (2015). Различие между активным и латентным туберкулезом основано на соотношении антиген-специфической продукции IP-10, индуцированной митогеном. J. Clin. Microbiol. 53, 504–510. DOI: 10.1128 / JCM.02758-4

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Кац, Н., Чавес, А., и Пеллегрино, Дж. (1972). Простое устройство для количественного анализа толстого мазка кала при Schistomiasismansoni. Ред.Med. Троп. Сан-Паулу 14, 397–400.

Google Scholar

Кумар Н. П., Анурадха Р., Андраде Б. Б., Суреш Н., Ганеш Р., Шанкар Дж. И др. (2013). Циркулирующие биомаркеры туберкулеза легких и внелегочного туберкулеза у детей. Clin. Вакцина Иммунол. 20, 704–711. DOI: 10.1128 / CVI.00038-13

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Кю, Х. Х., Мэддисон, Э. Р., Генри, Н. Дж., Мамфорд, Дж. Э., Барбер, Р., Шилдс, К., и другие. (2018). Глобальное бремя туберкулеза: результаты исследования глобального бремени болезней, 2015 г. Lancet Infect. Дис. 18, 261–284. DOI: 10.1016 / S1473-3099 (17) 30703-X

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Latorre, I., Díaz, J., Mialdea, I., Serra-Vidal, M., Altet, N., Prat, C., et al. (2014). IP-10 — точный биомаркер для диагностики туберкулеза у детей. J. Infect. 69, 590–599. DOI: 10.1016 / j.jinf.2014.06.013

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Лайтер, Дж., Риго, М., Хьюи, М., Пэн, К. Х. и Поллак, Х. (2009). Хемокин IP-10: дополнительный маркер латентной туберкулезной инфекции у детей. Внутр. J. Tuberc. Lung Dis. 13, 731–736.

PubMed Аннотация | Google Scholar

Лайт-Фишер, Дж., Пэн, К. Х., и Цзе, Д. Б. (2010). Цитокиновые ответы на QuantiFERON®пептиды, очищенное производное белка и рекомбинантный ESAT-6 у детей с туберкулезом. Внутр. J. Tuberc. Lung Dis. 14, 1548–1555.

PubMed Аннотация | Google Scholar

Майну-Фаулер, Т., и Брок, Дж. Х. (1985). Влияние дефицита железа на реакцию лимфоцитов мышей на конканавалин а: важность железа, связанного с трансферрином. Иммунология 54, 325–332.

PubMed Аннотация | Google Scholar

Марэ, Б. Дж., Ги, Р. П., Шааф, Х. С., Хесселинг, А. С., Обихара, К. С., Нельсон, Л. Дж. И др. (2004). Клиническая эпидемиология детского туберкулеза легких: критический обзор литературы до химиотерапевтической эры. Внутр. J. Tuberc. Lung Dis. 8, 278–285.

PubMed Аннотация | Google Scholar

Майкл Ф. и Холик М. (2007). Дефицит витамина D. N. Engl. J. Med. 357, 266–281.

Google Scholar

Мюллер, Х., Детьен, А.К., Шук, С.Д., Гучмидт, А., Ван, У., Магдорф, К. и др. (2008). Mycobacterium tuberculosis, CD4 +, IFNγ + и TNFα + многофункциональные Т-клетки памяти коэкспрессируют GM-CSF. Цитокин 43, 143–148.DOI: 10.1016 / j.cyto.2008.05.002

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Наир П., Венкатеш Б. и Центр Дж. Р. (2018). Дефицит витамина D и добавки при критических заболеваниях — известные и известные неизвестные. Крит. Уход 22, 1–9. DOI: 10.1186 / s13054-018-2185-88

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Никол, М. П., Гнанашанмугам, Д., Браунинг, Р., Клик, Э. С., Куэвас, Л. Е., Детджен, А., и др. (2015).План устранения пробелов в исследованиях в области разработки биомаркеров детского туберкулеза. Clin. Заразить. Дис. 61, S164 – S172. DOI: 10.1093 / cid / civ613

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ноннеке, Б. Дж., Уотерс, В. Р., Фут, М. Р., Хорст, Р. Л., Фаулер, М. А., и Миллер, Б. Л. (2003). Влияние 1,25-дигидроксивитамина D 3 in vitro на секрецию интерферона-γ и фактора некроза опухоли-α лейкоцитами крови молодняка и взрослого крупного рогатого скота, вакцинированного Mycobacterium bovis БЦЖ. Внутр. J. Vitam. Nutr. Res. 73, 235–244. DOI: 10.1024 // 0300-9831.73.4.235

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Олаканми О., Бритиган Б. Э. и Шлезингер Л. С. (2000). Галлий нарушает метаболизм железа микобактерий, находящихся в макрофагах человека. Заражение. Иммун. 68, 5619–5627. DOI: 10.1128 / IAI.68.10.5619-5627.2000

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Пай, М., и Бер, М. (2016). Скрытая инфекция микобактериями туберкулеза и анализы высвобождения гамма-интерферона. Microbiol. Спектр. 4, 1–10. DOI: 10.1128 / microbiolspec.TBTB2-0023-16

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Перес-Поркуна, Т. М., Аскасо, К., Мальхейро, А., Абеллана, Р., Мартинс, М., Сардинья, Дж. Ф. Дж. И др. (2014). Инфекция Mycobacterium tuberculosis у детей раннего возраста: анализ результатов диагностических тестов. PLoS One 9: e97992. DOI: 10.1371 / journal.pone.0097992

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Перес-Велес, К.М., Ройя-Пабон, К. Л., и Марэ, Б. Дж. (2017). Системный подход к диагностике внутригрудного туберкулеза у детей. J. Infect. 74, S74 – S83. DOI: 10.1016 / S0163-4453 (17) 30195-90

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Рагаб Д., Солиман Д., Самаха Д. и Ясин А. (2016). Статус витамина D и его модулирующее влияние на продукцию интерферона гамма и интерлейкина-10 мононуклеарными клетками периферической крови в культуре. Цитокин 85, 5–10.DOI: 10.1016 / j.cyto.2016.05.024

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Рувальд М., Абье М. Г. и Равн П. (2012). Анализ высвобождения IP-10 в диагностике туберкулезной инфекции: текущее состояние и будущие направления. Expert Rev. Mol. Диаг. 12, 175–187. DOI: 10.1586 / erm.11.97

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Рувальд, М., Бодмер, Т., Майер, К., Джепсен, М., Хааланд, М. Б., Ойген-Ольсен, Дж., и другие. (2008). Оценка потенциала IP-10 и MCP-2 в качестве биомаркеров для диагностики туберкулеза. евро. Респир. J. 32, 1607–1615. DOI: 10.1183 / 0

36.00055508

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ruhwald, M., Dominguez, J., Latorre, I., Losi, M., Richeldi, L., Pasticci, M. B., et al. (2011). Многоцентровая оценка точности и эффективности IP-10 для диагностики инфекции M. tuberculosis. Туберкулез 91, 260–267.DOI: 10.1016 / j.tube.2011.01.001

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Тел, Э. С., Хилгарт, Х., Брин-Лайлз, М., Маккой, К., Флури, Р., Бриер, Л. Е., и др. (2018). Сравнение тестов QuantiFERON-TB gold plus и QuantiFERON-TB gold в пробирке на высвобождение гамма-интерферона у пациентов с риском туберкулеза и у медицинских работников. J. Clin. Microbiol. 56, 1–12. DOI: 10.1128 / JCM.00614-8

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Том, Р.Э., Элмор, М. Дж., Уильямс, А., Эндрюс, С. К., Дробневски, Ф., Марш, П. Д. и др. (2012). Экспрессия ферритина, лактоферрина, рецептора трансферрина и растворенного носителя семейства 11A1 в ответе хозяина на вакцинацию БЦЖ и заражение микобактериями туберкулеза. Vaccine 30, 3159–3168. DOI: 10.1016 / j.vaccine.2012.03.008

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Тогун, Т. О., Маклин, Э., Кампманн, Б., и Пай, М. (2018). Биомаркеры для диагностики детского туберкулеза: систематический обзор. PLoS One 13, 1–19. DOI: 10.1371 / journal.pone.0204029

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Веласко-Арнаис, Э., Сориано-Арандес, А., Латорре, И., Альтет, Н., Домингес, Дж., Фортуни, К., и др. (2018). Проведение туберкулиновых кожных проб и тестов высвобождения гамма-интерферона у детей младше 5 лет. Педиатр. Заразить. Дис. J. 37, 1235–1241. DOI: 10.1097 / INF.0000000000002015

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Вильяр-Эрнандес, Р., Latorre, I., Minguez, S., Diaz, J., Garcia-Garcia, E., Muriel-Moreno, B., et al. (2017). Использование IFN-гамма и определения IP-10 в диагностике латентной туберкулезной инфекции у пациентов с воспалительными ревматическими заболеваниями. J. Infect. 75, 315–325. DOI: 10.1016 / j.jinf.2017.07.004

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Уиттакер Э., Джонс К. и Кампманн Б. (2012). Туберкулез у детей. евро. Респир. Monogr. 58, 206–218.

Google Scholar

Вон, Э.Дж., Чой, Дж. Х., Чо, Ю. Н., Джин, Х. М., Ки, Х. Дж., Пак, Ю. В. и др. (2017). Биомаркеры для различения латентной туберкулезной инфекции и активной формы туберкулеза. J. Infect. 74, 281–293. DOI: 10.1016 / j.jinf.2016.11.010

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Всемирная организация здравоохранения [ВОЗ] (2009 г.). AnthroPlus для персональных компьютеров. Руководство: Программное обеспечение для оценки роста детей и подростков в мире. Женева: Всемирная организация здравоохранения.

Google Scholar

Всемирная организация здравоохранения [ВОЗ] (2013 г.). Рекомендация: Обновления по ведению тяжелой острой недостаточности питания у младенцев и детей. Женева: Всемирная организация здравоохранения.

Google Scholar

Всемирная организация здравоохранения (2017 г.). Консенсусный отчет: разработка профиля целевого продукта (TPP) и основы оценки теста для прогнозирования прогрессирования от туберкулезной инфекции до активного заболевания. Женева: Всемирная организация здравоохранения.

Google Scholar

Всемирная организация здравоохранения [ВОЗ] (2018a). Global Tuberculosis Report 2018. Geneva: World Health Organization.

Google Scholar

Всемирная организация здравоохранения [ВОЗ] (2018b). Дорожная карта по борьбе с туберкулезом у детей и подростков. Женева: Всемирная организация здравоохранения.

Google Scholar

Zhou, Y., Du, J., Hou, H.-Y., Lu, Y.-F., Yu, J., Mao, L.-Y., et al. (2017). Применение модели иммунного ядра для дифференциации активного туберкулеза от латентной туберкулезной инфекции, а также для мониторинга противотуберкулезной терапии. Фронт. Клетка. Заразить. Microbiol. 7, 1–11. DOI: 10.3389 / fcimb.2017.00457

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

FINS, австралийская торговая марка Стивена Лайалла Сноу как попечителя Fins IP Trust. Номер заявки: 1407410 :: Торговая марка Elite Trademarks